细胞名称：小鼠表皮细胞JB6Cl30-7b
产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2
细胞数量：1x10^6；1x10^6
保存温度：37℃；-198℃
运输方式：常温保温运输；干冰运输
安全等级：1
用途限制：仅供科研2类
培养体系：DMEM高糖培养基（Hyclone）+10%胎牛血清（Gibco）+1%双抗（Hyclone）
培养温度：37℃
二氧化碳浓度：5%
简介：小鼠表皮细胞JB6Cl30-7b细胞取自ICR小鼠，贴壁培养，不规则形态。
注释：倍增时间46h。
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参考文献
Frizzled4在小鼠毛囊周期中的表达
,PP.631-635
陈年,伍津津,邱伟明,唐辉,唐书谦
Keywords:Frizzled,毛囊,小鼠,Wnt,抗体
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Abstract:
目的探讨Wnt蛋白的受体分子Frizzled4在小鼠毛囊周期中的表达、功能及其意义。方法利用实时定量PCR、RT-PCR、Westernblot和免疫荧光等技术分别检测Frizzled4mRNA和蛋白在毛囊生长期（P1d、P3d、P8d）、退化期（P16d）和静止期（P21d）中的表达。免疫荧光技术检测Frizzled4在小鼠皮肤上皮细胞JB6cl30-7b中的定位，MTT检测用抗Frizzled4抗体处理JB6cl30-7b细胞后的增殖情况。结果在毛囊生长期早期，Frizzled4mRNA和蛋白在P1d的小鼠背部皮肤中表达明显，膜表达于Bulge、毛囊外根鞘及毛球外侧。在P3d，Frizzled4蛋白表达明显上调，主要表达于Bulge、毛囊外根鞘、内根鞘、precortex、部分毛球外侧。在生长中期（P8d），Frizzled4蛋白的表达z强，集中在毛囊Bulge、外根鞘上段及内根鞘。当毛囊进入退化期（P16d），Frizzled4mRNA和蛋白的表达显著降低（P<0.05），此时主要定位于Bugle。而在静止期，Frizzled4mRNA和蛋白表达z低（P<0.05），只有少量Frizzled4阳性细胞出现在毛囊Bulge。免疫荧光技术检测Frizzled4蛋白同样也在JB6cl30-7b细胞膜中表达。MTT结果显示与对照组相比，10μg/mL的抗Frizzled4抗体处理JB6cl30-7b细胞后光密度值明显降低（P<0.05），而20μg/mL的抗Frizzled4抗体处理后的光密度值降到z低（P<0.05）。结论Frizzled4在毛囊周期中的表达具有时空特异性。伴随着毛囊的生长，Frizzled4的mRNA和蛋白水平都呈现高表达，随着毛囊的退化而表达降低，直至静止期维持低表达水平。拮抗Frizzled4蛋白的作用促使细胞增殖受到明显抑制，提示Frizzled4的表达与毛囊细胞的增殖和分化相关。
验收细胞注意事项
1、收到小鼠表皮细胞JB6Cl30-7b细胞，请查看瓶子是否有破裂，培养基是否漏出，是否浑浊，如有请尽快联系。
2、收到小鼠表皮细胞JB6Cl30-7b细胞，如包装完好，请在显微镜下观察细胞。,由于运输过程中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况，出现此状态时，请不要打开细胞培养瓶，应立即将培养瓶置于细胞培养箱里静止3-5小时左右，让细胞先稳定下，再于显微镜下观察，此时多数细胞会重新贴附于瓶壁。如细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，如台盼蓝染色证实细胞活力正常请按悬浮细胞的方法处理。
3、收到小鼠表皮细胞JB6Cl30-7b细胞后，请镜下观察细胞，用恰当方式处理细胞。若悬浮的细胞较多，请离心收集细胞，接种到一个新的培养瓶中。弃掉原液，使用新鲜配制的培养基，使用进口胎牛血清。刚接到细胞，若细胞不多时血清浓度可以加到15％去培养。若细胞迏到80%左右，血清浓度还是在10％。
4、收到小鼠表皮细胞JB6Cl30-7b细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养基吸出，留下5-10ML培养基继续培养：超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心3分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
5、将培养瓶置于37℃培养箱中培养，盖子微微拧松。吸出的培养基可以保存在灭菌过的瓶子里，存放于4℃冰箱，以备不时之需。
6、24小时后，小鼠表皮细胞JB6Cl30-7b细胞形态已恢复并贴满瓶壁，即可传代。（贴壁细胞）将培养瓶里的培养基倒去，加3-5ml（以能覆盖细胞生长面为准）PBS或Hanks’液洗涤后弃去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化，消化时间以具体细胞为准，一般1-3分钟，不超过5分钟。可以放入37℃培养箱消化。轻轻晃动瓶壁，见细胞脱落下来，加入3-5ml培养基终止消化。用移液管轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后将溶液吸入离心管内离心，1000rpm/5min。弃上清，视细胞数量决定分瓶数，一般一传二，如细胞量多可一传三，有些细胞不易传得过稀，有些生长较快的细胞则可以多传几瓶，以具体细胞和经验为准。（悬浮细胞）用移液管轻轻吹打瓶壁，直接将溶液吸入离心管离心即可。
7、贴壁细胞，悬浮细胞。严格无菌操作。换液时，换新的细胞培养瓶和换新鲜的培养液，37℃，5%CO2培养。
特别提醒：原瓶中培养基不宜继续使用，请更换新鲜培养基培养。
