为保证细胞株的单克隆验证服务，一般会采用以下方法：
（1）两轮有限稀释。根据泊松分布的原理计算，按照低于0.5cells/well进行两轮优先稀释，理论单克隆率在95%以上，但是需要注意的是，有限稀释法得到的单克隆是没办法证明为单克隆的，只能推定为单克隆；
（2）一轮有限稀释或者单细胞铺板设备搭配单克隆成像设备。不同于概率计算和统计，这个方法可以提供单克隆源性的影像数据，但同时面临一定的挑战。首先，需要考量细胞是否沉底，落孔后细胞的位置等；其次，成像设备的孔位校准、微孔板底聚焦、光源、镜头位移、分辨率等都会影响图像的准确性和有效性。
因此，在项目开展前对单细胞铺板以及单克隆成像的整套细胞株构建工艺流程的可靠性进行一定的方法学验证是非常有必要的。
从研发的细胞株工艺平台搭建方面，单克隆源性方法学验证后的流程更可控，确立好的SOP更易于执行，极大地降低工艺开发的潜在风险；当项目走到申报阶段，方法学验证后的单克隆成像图片严谨科学，挑战更小，结合细胞库均一性验证的证明，达到双重保险的目的，确保项目申报的细胞株构建环节的内容顺利和快速的通过。
如何进行单克隆源性的方法学验证：
方法学验证需要基于每个公司的现有工艺平台，如果选择的工艺路线是两轮有限稀释，那么可以根据实际结果结合泊松分布来推算铺板密度的合理性。如果选择一轮有限稀释或者单细胞铺板设备搭配单克隆成像设备，那么就需要考虑铺板后细胞沉底条件、细胞在孔板中位置以及单克隆成像设备对单克隆的识别能力。此外，基于单克隆铺板设备的工艺平台，还需要考量和评估不同项目的交叉污染风险。
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