CE-SDS蛋白检测
蛋白质的分子大小变异体检测是蛋白质生产过程中至关重要的检测指标,CE-SDS法检测广泛应用在包括单抗在内的各种蛋白质纯度检测中。
CE-SDS蛋白检测是经过验证的灵敏度、准确度、性价比、质量标准更高的国产化新型检测试剂盒。试剂盒中包含优化的SDS样品缓冲液A(PH=9.0)SDS样品缓冲液B(PH=6.5)[1]涂层毛细管、优化的凝胶缓冲液(保密配方)、内控标准品、酸碱冲洗液等试剂及耗材。经过验证,试剂盒可广泛应用于蛋白质还原及非还原CE-SDS纯度检测,并且可在市面上常见毛细管电泳系统中使用。
样品处理
1.蛋白分子量标准品制备
(1)非还原模式
用样品缓冲液溶解稀释蛋白分子量标准品,使蛋白的终浓度0.2-2mg/ml之间,总体积95ul。加入5ulN-乙基马来酷亚胺(NEM)溶液。盖好瓶盖,用封口膜封好,并充分混匀，离心机6000rpm离心至少1分钟。70°C水浴10分钟。室温冷却至少3分钟,离心机6000rpm离心至少1分钟。转移95ul制备好的样品至内插管中,内插管放入进样瓶中,盖好进样瓶盖子。
(2)还原模式
用样品缓冲液溶解稀释蛋白分子量标准品,使蛋白的终浓度在0.2-2.0mg/mL之间,总体积为95uL。加入5ul2-琉基乙醇,盖上瓶盖,用封口膜封好,并充分混匀,离心6000rpm离心至少1分钟。70°C水浴10分钟。室温冷却至少3分钟,离心机6000rpm离心至少1分钟。转移95ul制备好的样品至内插管中,内插管放入进样瓶中,盖好进样瓶盖子。
2.蛋白样品预处理
蛋白样品的脱盐:信号强度和分离度对于蛋白中盐的浓度十分敏感,如果蛋白样品浓度低于10mg/ml并且缓冲液盐的终浓度高于50mM,样品的进样效率就会降低以下是使用超滤法对样品的脱盐步骤。
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