目前肌酐酶法的测定主要有两种,一种是监测肌酐亚氨水解酶偶联谷氨酸脱氢酶变化的酶动力学测定,另一种为肌酐氨基水解酶偶联肌氨酸氧化酶和过氧化物酶发生Trinder 反应的酶动力学测定。其中,后者由于试剂价格相对较低,不受血氨和其他干扰物的影响,目前已有大量的商品试剂盒供应。笔者对比了肌酐酶-肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐和Jaffe苦味酸法测定血清肌酐,现将研究结果报道如下。
一、实验所需试剂
肌酐酶-肌氨酸氧化酶法试剂,双试剂,R1∶R2=5∶1,混合后各物质浓度为∶pH7.9磷酸盐缓冲液 100 mmol/L,肌氨酸氧化酶≥7 kU/L,4-氨基安替比林2 mmol/L,肌酐酶≥160 kU/L,EHSPT(TOOS)1 mmol/L,抗坏血酸氧化酶≥10 kU/L,亚铁氰化钾20 μmol/L,过氧化物酶≥5 kU/L,肌酸酶≥15 kU/L,叠氮钠0.095%。
二、肌酐酶-肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐的优势
酶法测定血清肌酐的特异性较高,干扰因素很小,准确性和精密度更高,更加适宜于自动分析。本文介绍的肌酐酶-肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐由于采用了双试剂,并在试剂中加入了抗坏血酸氧化酶,能有效地消除内源性肌酸和维生素 C对各级酶促反 应的干扰。试剂中加入了亚铁氰化钾等物质,可使本法的抗胆红素干扰能力得到加强,进一步提高测定结果的准确性。此外,该法由于操作简便、试剂价格相对低廉、精密度好、线性范围宽、反应条件温和,并可应用于自动化分析,是一种值得推荐的好方法。
三、Jaffe苦味酸法测定血清肌酐的缺点
Jaffe苦味酸法测定血清肌酐是临床试验室最常用的方法,该法最大的问题是极易受到非特异性色素原和其他物质的干扰,如抗坏血酸、α-酮酸、丙酮、乙酰乙酸、葡萄糖、蛋白质、胍类等物质能提高反应速率,引起正干扰。虽然能够排除大部分假肌酐干扰,但仍受到某些物质如α-酮酸的正干扰和胆红素及其代谢产物的负干扰。
肌氨酸氧化酶可以与色原底物EHSPT(TOOS)、过氧化物酶等试剂一起用于血清中肌酐水平的测定,此测定方法具备多种优势,德晟提供的酶制剂包括肌氨酸氧化酶SOX、色原底物EHSPT(TOOS),缓冲剂等在内的多种试剂盒原料,SOX酶是冻干粉的状态,稳定性更好,实验时用多少取多少,可避免反复冻融影响酶活。