关键词：4-羟乙基哌嗪乙磺酸、HEPES、CAS7365-45-9、德晟
HEPES中文全称4-羟乙基哌嗪乙磺酸，CAS为7365-45-9，hepes缓冲液的主要成分是羟乙基哌嗪乙硫磺酸（2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonic acid），HEPES是一种非离子两性缓冲液,其在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力。其最大优点是在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的PH值.在这种培养条件下,细胞培养瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。
大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色.HEPES有些昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒. 原则上,HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制.实际操作中并非如此简单. 溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长也是很重要的。
HEPES使用方法有两种：
(1)HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中，再过滤除菌。每1000ml培养液中加入2.38克HEPES，待溶后用lN NaOH 调pH至7.2，滤过除菌后使用。此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L。
(2)亦可配成 100 x 贮存液(l mol/L)，使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液，最终应用浓度仍为10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES贮存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml双蒸水中，用lN NaOH调pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，过滤除菌，分装小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。
4-羟乙基哌嗪乙磺酸对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L，一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。可用于生物缓冲剂；分离与分析RNA核组分的反应缓冲液、预杂交缓冲液、杂交缓冲液；用于RNA与T4RNA。分子生物学级用于用T4RNA连接酶Chemicalbook进行RNA3'-末端标记，分离与分析核RNA之反应缓冲液组分、预杂交缓冲液缓和杂交缓冲液成分。细胞-细胞黏附，细胞短期聚集培养，清洗组织、细胞所用缓冲液。
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